動物細胞多數(shù)需要微堿性環(huán)境，pH約為7.2~7.4，以不超出6.8~7.6范圍為宜。緩沖系統(tǒng)對于維持培養(yǎng)基的pH是至關重要的，動物培養(yǎng)基的pH是通過模擬血漿中天然存在的

    CO2/NaHCO3（實際是CO32-/HCO3-）系統(tǒng)來控制的。配置動物培養(yǎng)基時，會將NaHCO3作為等滲溶液的一部分添加到培養(yǎng)基。

     一方面，由于NaHCO3不穩(wěn)定，易分解產CO2，CO2從培養(yǎng)液中游離到空氣中，會使培養(yǎng)液pH升高；另一方面，細胞呼吸產生的CO2以及代謝產生的酸性代謝產物，又使pH降低。

       在培養(yǎng)開始的一段時間，細胞較少，呼吸產生的CO2較少，前者作用大于后者，培養(yǎng)液中pH可能會明顯上升，這就需要培養(yǎng)箱中補充一定量的CO2來維持pH；而后期隨著細胞數(shù)目增多，細胞產生CO2增加，后者作用便大于前者，此時，培養(yǎng)基中pH可能會明顯降低，盡管大多動物細胞耐酸能力比耐堿能力略強一些，但如果超過警戒值，則需要更換培養(yǎng)基進行傳代。

     培養(yǎng)液中一般加入酚紅作為pH指示劑，所以此培養(yǎng)基中顏色變化是：櫻桃紅色→粉紅色→黃色。如果使用培養(yǎng)基之前，先通入CO2，或在CO2培養(yǎng)箱內進行開放式培養(yǎng)，則培養(yǎng)基顏色變化是：櫻桃紅色→黃色。如果培養(yǎng)基變黃，則需要及時更換培養(yǎng)基。

    培養(yǎng)箱中CO2濃度應與培養(yǎng)液中NaHCO3濃度相平衡，如果培養(yǎng)箱中CO2濃度設定在5%，培養(yǎng)液中NaHCO3的加入量應為1.97 g/L；如果CO2濃度維持在10%，則NaHCO3的加入量應為3.95 g/L。

     動物細胞對pH變化比較敏感，但植物細胞就沒那么嬌弱了，培養(yǎng)過程中pH的變化幅度只要別太大，對它并不會造成明顯損傷。